細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒說明書
上海起發(fā)生物科技有限公司（Shanghai BioHub Biotechnology Co., Ltd.）屬于上海起發(fā)實驗試劑有限公司（2009年成立）旗下的子公司，成立的初衷是建立上海起發(fā)生物自有品牌，打造優(yōu)質的生物試劑民族自有品牌。降低成本的同時，把好生物產業(yè)鏈中的國產生物試劑品質關。未來讓每一個和我們一樣擁有民族情懷的企業(yè)，共同創(chuàng)世界優(yōu)秀的中國生物制造企業(yè)，圓夢中國。
產品詳情
貨號 | 規(guī)格 | 價格 |
78EA10010-100T | 100T | 詢價 |
產品描述
細胞周期（cell cycle）是指連續(xù)分裂的細胞從一次分裂完成開始到下次分裂為止的全過程，分為間期和分裂期（M期），細胞間期又分為休眠期（G0期）,DNA合成前期（G1期），DNA合成期（S期），DNA合成后期（G2期）整個周期可以表示為：G0-G1-S-G2-M。
本公司生產的細胞周期檢測是通過經(jīng)典的碘化丙啶染色色 (Propidium iodide staining，PI staining)方法進行周期分析的檢測試劑盒。PI是一種DNA的熒光染料，可以結合雙鏈DNA產生熒光，其熒光強度與DNA的含量成正比。經(jīng)碘化丙啶染色后假設G0/G1期細胞的熒光強度為1，那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細胞的熒光強度的理論值為2，正在進行DNA復制的S期細胞的熒光強度為1-2之間。凋亡細胞由于細胞核發(fā)生濃縮以及發(fā)生DNA片段化導致部分基因組DNA片段在染色過程中丟失，因此凋亡細胞碘化丙啶染色后呈現(xiàn)明顯的弱染，即熒光強度小于1，在流式檢測的熒光圖上出現(xiàn)所謂的sub-G1峰，即凋亡細胞峰。利用流式細胞儀進行熒光分析從而對DNA進行定量，實現(xiàn)細胞周期檢測。
產品組成
本試劑盒常用于貼壁細胞或者懸浮細胞的培養(yǎng)，如果檢測對象為組織樣品，必須消化成單個細胞后在進行染色檢測，規(guī)格為50T，每T可檢測的樣本的細胞數(shù)量在10-100萬之間。
名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
染色緩沖液 | 25 mL | -20℃ |
碘化丙啶染色液(20X) | 1.25 mL | -20℃ |
RNase A (50X) | 0.5 mL | -20℃ |
運輸與保存
冰袋運輸，-20℃保存一年。
實驗步驟
1. 細胞樣品的準備：
a. 對于貼壁細胞：收集培養(yǎng)液上清，PBS潤洗細胞一遍，胰酶消化細胞，加入前面收集的培養(yǎng)液終止消化，得到的細胞懸液1000g離心5min收集細胞沉淀備用。
b. 對于懸浮細胞：1000g左右離心3-5 min，沉淀細胞。
（如果細胞沉淀不充分，可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力）
2.細胞固定：
（1）向步驟1收集得到的沉淀中加入300 μL預冷的PBS，輕柔吹打混勻，輕柔渦旋的過程中滴加700 μL預冷的無水乙醇，最后于4℃固定30 min或更長時間。通常固定2 h或以上更能保證染色效果，固定12-24h可能效果更佳。
（2）1000g左右離心5 min去除固定液，預冷PBS清洗一遍后再次離心，小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的PBS，以避免吸走細胞。輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞，避免細胞成團。
3. 細胞染色：
（1）參考下表配制碘化丙啶染色液（配置好的碘化丙啶染色液4℃保存，宜當日內使用）：
名稱 | 1個樣品 |
染色緩沖液 | 0.5 mL |
碘化丙啶染色液(20X) | 25 μL |
RNase A (50X) | 10 μL |
總體積 | 0.535 mL |
（2）每個樣品中加入0.5 mL的碘化丙啶染色液緩慢并充分重懸細胞沉淀， 37oC避光孵育30min。隨后可以4oC或冰浴避光存放。染色完成后宜在24 h內完成流式檢測。
4.流式檢測分析：檢測激發(fā)波長為488 nm處紅色熒光，用流式細胞儀對DNA含量進行分析，確定細胞周期變化情況。
注意事項
（1）需自備PBS和70%乙醇，整個過程避光操作。
（2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套。
（3）本產品僅作科研用途！
